Ters iyontoforez yöntemi ile homosistein molekülünün girişimsel olmayan amperometrik metotla tayin edilmesi
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ondokuz Mayıs Üniversitesi, Lisansüstü Eğitim Enstitüsü, Kimya Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2021
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: EMEL EREN
Danışman: Nihat Tınkılıç
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Homosistein, kronik kalp rahatsızlıklarında kandaki düzeyi önemli bir gösterge olan, anlık tayini ve izlenmesi önem arz eden bir aminoasittir. Tez çalışmasında, homosisteinin, ters iyontoforez tekniği uygulanarak ve non-invaziv olarak, doku sıvısı ile birlikte deri dışına alınması ve alınan bu sıvıda, amperometrik homosistein biyosensörü kullanılarak tayin edilmesine hizmet eden giyilebilir bir biyosensör sisteminin geliştirilmesi hedeflenmiştir. Bu amaçla, tez çalışması üç aşamalı olarak yürütülmüş olup ilk aşamada, bir Screen Printed Karbon Elektrodun (SPCE) yüzeyi, kitosan, ferrosen ve karbon Nano Tüpün (CNT) belli oranlarını içeren bir karışımla modifiye edilmiştir. Bu yüzeye, D-aminoasit oksidaz enziminin gluteraldehit ile immobilizasyonu sağlanarak amperometrik homosistein biyosensör geliştirilmiş olup, kalibrasyon aralığı 3-100, tayin limiti (LOQ) 2,184 µM olarak tespit edilmiştir. Literatürdeki örneklerine göre performansı başarılı olup tek kullanım için uygundur. Amperometik homosistein biyosensörün doğruluk testi insan serum örneği kullanılarak yapılmış olup elde edilen veriler HPLC sonuçları ile karşılaştırılmıştır. İkinci aşamada, deri yüzeyinden doku sıvısının dışarıya alınmasını simüle eden bir ters iyontoforez hücresi hazırlanmıştır. Ayırıcı membran olarak selüloz ester kullanılmıştır. Farklı homosistein konsantrasyonlarında, uygulanan akım yoğunluğu ve iyontoforez süresinin optimizasyonu yapılarak aralarındaki ilişki ortaya konulmuştur. Elde edilen verilerin literatür ile uyumlu olduğu gözlenmiştir. Son aşamada, optimize edilen ters iyontoforez şartlarında, homosisteinin ekstraksiyonu gerçekleştirilmiş ve elde edilen ektraktların amperometik homosistein biyosersörü kullanılarak damlatma yöntemiyle tayini gerçekleştirilmiştir. Vücuttaki homosisteini simüle eden 15-100 µM aralığında farklı konsantrasyona sahip standart çözeltilerin, 30 µM'ın altındaki değerlerinden ekstrakte edilen homosistein miktarları biyosensörün tayin limitinin altında kaldığı için analiz edilememiştir. 30 µM'dan daha yüksek konsantrasyona sahip standart çözeltilerinden elde edilen ekstraktlardaki homosisteinin ise, amperometirk homosistein biyosensörün çalışma aralığına denk geldiği gözlenmiş ve başarı ile tayini gerçekleştirilmiştir. Anahtar Kelimler: Ters iyontoforez, amperometrik homosistein biyosensör, amperometrik enzim biyosensör, homosistein, D-Aminosit enzim biyosensör