Fosfinotrisin N-asetiltransferaz (PAT) enzimini kodlayan siyanobakteriyel genlerin klonlanması, ekspresyonu ve enzim aktivitelerinin analizi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ondokuz Mayıs Üniversitesi, Ziraat Fakültesi, Tarımsal Biyoteknoloji Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2018
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: EBRU YILMAZ
Danışman: Aslıhan Kurt Kızıldoğan
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Fosfinotrisin N-asetiltransferaz (PAT), fosfinotrisin (PPT) içeren herbisitlere direnç sağlamak amacıyla bitkilerde ekspresyonu yapılan bakteri kökenli bir enzimdir. Transgenik bitkilerde fosfinotrisin N-asetiltransferaz (PAT) proteininin ekspresyonu, bir herbisit olan glufosinata karşı tolerans kazandırmaktadır. Siyanobakterilerde bu enzimin var olduğu dizi analizleri ile tespit edilmişse de potansiyel PAT aktiviteleri henüz belirlenmemiştir. Bu çalışmada Anabaena sp. PCC7120, Synechocystis sp. PCC6803 ve Gloeobacter violaceus sp. PCC7421 suşlarında, varsayımsal (putatif) olarak PAT enzimini kodladığı belirlenen sırasıyla alr4468, sll1647 ve glr2526 genleri His-Tag etiketi içeren pET28a+ ifade vektörüne klonlanmıştır. Ardından, rekombinant vektörler proteaz içermeyen E. coli BL21(DE3) hücrelerine aktarılmışlardır. 1 mM IPTG ile indüklenen rekombinant E. coli BL21 kültürlerinde rekombinant Alr4468 (rAlr4468) veSll1647 (rSll1647) proteinlerinin ifadeleri sağlanırken rekombinant Glr2526 (rGlr2526)'nin ifadesi gerçekleştirilememiştir. En yüksek in vitro PAT aktiviteleri IPTG ile indüklenmiş hücre özütlerinin kullanıldığı enzim çalışmalarında elde edilmiştir ve kontrollere kıyasla sırası ile 3.47 (rAlr4468 için) ve 2.53(rSll1647 için) kat daha yüksek bulunmuştur. Sonuç olarak, yüksek yapılı bitkilerle benzer fizyolojik özelliklere sahip olan siyanobakterilere ait alr4468 ve sll1647 genleri, gelecek çalışmalarda herbisitlere dirençli yerel transgenik bitkilerin oluşturulmasında kaynak olarak kullanılabilecektir.